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嘔吐毒素的檢測方法與作用機制

發布時間:2018-06-13 19:41:24來源:深芬儀器

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)又稱嘔吐毒素(vomitoxin),主要是由鐮刀菌的某些種產生的化學結構和生物活性相似的有毒代謝產物——單端孢霉烯族化合物中的一種。

嘔吐毒素


DON的主要產生菌是禾谷鐮刀菌(Fusariumgraminearum),據報道也有其它一些鐮刀菌可產生 。DON于1972年由日本的Morooka等首次分離,同年,Yoshizawa等闡明了這種新的真菌毒素的結構,并將其命名為4-deoxynivalenol(DON) 。


DON廣泛存在于全球,主要污染小麥、大麥、玉米等谷類作物,也污染糧食制品,人和動物在誤食被該毒素污染的糧谷類后可以產生廣泛的毒性效應。另外,它還常與其它的霉鹵毒素如黃曲霉毒素共同污染農作物,進入人體后可以相互影響。近年來發現DON可能與人類食管癌、IGA腎病有關,對人類及動物的健康構成威脅。DON屬于劇毒或中等毒物,研究表明,DON在體內可能有一定的蓄積,但無特殊的靶器官,具有很強的細胞毒性。人畜攝入了被DON污染的食物/飼料后,會導致厭食、嘔吐、腹瀉、發燒、站立不穩、反應遲鈍等急性中毒癥狀,嚴重時損害造血系統造成死亡,但不同的動物對DON的敏感程度不一,豬是最敏感的動物。研究表明,DON可能對免疫系統有影響,有明顯胚胎毒性和一定致畸作用,可能有遺傳毒性,但無致癌、致突變作用。由于DON的危害嚴重,引起了各國的普遍重視。


有調查顯示:


中國飼料和原料霉菌毒素污染超標的比例為60%—70%,其中嘔吐毒素的超標比例接近70%,被檢的玉米、麩皮和DDGS樣品中嘔吐毒素的檢出率均高達90%以上,分別為92.9%、92.3%和100%。


豆粕的檢出率較低為54.5%。


麩皮和豆粕中嘔吐毒素未見超標,其平均含量為0.44mg/kg和0.05mg/kg,屬于輕度污染。


玉米嘔吐毒素的超標率為57.1%,毒素平均含量為1.01mg/kg,其中最高含量為2.13mg/kg,屬于中度污染。


DDGS中嘔吐毒素的超標率為88.2%,毒素平均含量為1.36mg/kg,最低含量為0.85mg/kg,最高含量為1.72mg/kg,屬于中度污染。


玉米和DDGS中嘔吐毒素的平均含量極顯著高于麩皮和豆粕(P<0.01),DDGS中嘔吐毒素的平均含量顯著高于玉米(P<0.05),麩皮中嘔吐毒素的平局你含量極顯著高于豆粕(P<0.01)。


被檢配合飼料中嘔吐毒素的檢出率為97.4%,仔豬料、中豬料、妊娠母豬料和哺乳母豬料的檢出率高達100%。


其中,乳豬料嘔吐毒素未見超標,其平均含量為0.28mg/kg,顯著低于其他種類全價料(P<0.05),屬于輕度污染。仔豬料、中豬料、大豬料、妊娠豬料和哺乳豬料均有不同程度的超標,超標率為14.3%、14.3%、22.2%、10.0%和23.1%,其最高含量分別為2.31、1.14、1.44、1.45mg/kg和1.52mg/kg,屬于中度污染。

 

“嘔吐毒素”不怕高溫126℃下加熱90分鐘仍有毒性。


蠟樣芽孢桿菌是一種在顯微鏡下看起來形狀像蠟一樣的革蘭染色陽性桿菌,在自然界廣泛存在,是引起食物中毒的常見細菌,與臭名昭著的炭疽桿菌是“同族兄弟”。


蠟樣芽孢桿菌很狡猾,在生長條件不好的情況下會產生一種被稱為“芽孢”的“外殼”,把自己保護起來,避免死亡。因此,蠟樣芽孢桿菌比其它細菌更耐熱,常常在加熱的條件下也不會死亡。


上世紀70年代以前,人們并未注意到蠟樣芽孢桿菌對人類健康的影響,以為只是一種自然界常見的非致病菌。但實際上,早在1937年就有人從病人的血液中分離到了這種細菌;上世紀50年代,挪威醫生首先報告了蠟樣芽孢桿菌引起的4起食物中毒事件,涉及600多人。后來,英國、日本、印度、澳大利亞、美國等地相繼發現蠟樣芽孢桿菌引起的食物中毒,我國于1973年首次報道蠟樣芽孢桿菌相關病例。近年來,蠟樣芽孢桿菌引起的食物中毒事件逐漸增多。據統計,1986年-2007年僅在我國文獻報道中的蠟樣芽孢桿菌食物中毒事件就有299起,甚至有導致死亡的病例發生。


“米”家族最易被盯上


蠟樣芽孢桿菌釋放何種毒素與細菌的類型和生長環境有關。有研究證實,血清1型蠟樣芽孢桿菌容易釋放嘔吐毒素;在米飯等淀粉類食物中,蠟樣芽孢桿菌容易產生嘔吐毒素,而在肉類等其它食品中,嘔吐毒素產生較少,而腸毒素增多。


一般來說,壞了的食品總是有異味,大家聞一聞就知道能不能吃,但蠟樣芽孢桿菌“放毒”特別隱蔽,含有毒素的食品大多無腐敗、變質現象,進食時不易被人們察覺。蠟樣芽孢桿菌食物中毒主要發生在夏季,在我國主要發生在6-9月。食物中毒的臨床表現有兩種類型:嘔吐型和腹瀉型。我國以嘔吐型多見,約占蠟樣芽孢桿菌食物中毒的76%,而歐美等西方國家以腹瀉型多見。這可能與我國的飲食結構有關。


嘔吐型的蠟樣芽孢桿菌食物中毒潛伏期短,一般在進食后0.5-6小時發生,主要表現為惡心、嘔吐,伴有乏力、低熱等癥狀,很少出現腹瀉。大多數病情較輕,24小時內可以自愈,但嚴重的可能引起肝衰竭、代謝性酸中毒、心肌或中樞神經系統損害,甚至導致死亡。引起嘔吐型食物中毒的主要食品是米飯及其制品(80%以上),如:米飯、炒飯、稀飯、米糕、米粉皮、米線等;涼面、豆腐也可以引發。


腹瀉型食物中毒較少見,中毒的原因是蠟樣芽孢桿菌腸毒素。潛伏期較長,一般在進食后6-15小時發生,臨床表現主要是水樣腹瀉和腹痛,很少伴有嘔吐癥狀。大多數在腹瀉數次后癥狀逐漸減輕,1天左右好轉。嚴重者可引起電解質紊亂、出血性腹瀉。引起腹瀉型食物中毒的食品較復雜,糧食、肉類、乳類食品均可引發,其中盒飯類混合食品較多見,可能是在分裝的過程中污染所致。

 

嘔吐毒素檢測方法:

 

1、膠體金定性卡法:

是嘔吐毒素最簡便的檢測方法,檢測不需要配套儀器,樣品處理簡單,五到十分鐘就可以看到檢測結果。可以根據G、T線,初步確定所測樣本毒素含量范圍,但不能給出具體數值。價格最低、沒有國標支持,適合企業初檢使用。


2、酶聯免疫吸附測定法:

依據該方法開發出來的嘔吐毒素檢測試劑盒,可以半定量的檢測樣品中嘔吐毒素的含量,目前國產試劑盒大量上市,價格適中,有國標支持,適合中小型企業質量控制,或者作為產品初步質量控制。


3、免疫親和柱為分離手段:用高效液相色譜儀作為檢測工具的分析方法。該項技術靈敏度高,測定范圍廣泛,采用單克隆免疫技術,可以特效性地將嘔吐毒素和其他真菌毒素分離出來,分離效率和回收率高,正確性和可靠性強,有國標支持。檢測成本高,儀器維護成本高。一般作為檢測機構終端判定方法,也有大型企業作為產品質量衛生指標控制方法。


4、膠體金定量分析卡法:是深圳市芬析儀器制造有限公司推出的光譜掃描吸峰方法,靈敏度高、結果可靠,可以和親和柱方法相媲美,檢測價格適中;有行業標準支持。適合中大型企業作為產品質量衛生指標控制。


5、液相或氣相串聯質譜法:一般作為高端實驗室實驗檢驗方法,主要作為研究或者國家部門對毒素情況監測、風險評估。

 

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